A DNS és az RNS extrakció közötti különbség

Kulcsfontosságú különbség - DNS vs RNS extrakció
 

A DNS és az RNS vizsgálata elengedhetetlen szempont a molekuláris biológia, a biotechnológia és a genetika alapelveinek megértéséhez. A tiszta DNS és RNS minták extrahálásához szükség van a kísérleti eljárások elvégzésére ezen vizsgálatok során. A fő különbség a DNS és az RNS extrakció között az A DNS-extrakciós folyamat tisztítja a DNS-t, az RNS-extrakció pedig az RNS-t. A DNS extrakciós eljárásnak három különböző lépése van: a sejtlízis és a membrán lipidek és fehérjék katabolizálása, a katabolitok tömörítése koncentrált sóoldattal és a DNS kicsapása etanollal. A háromlépéses eljárás két választható lépésből állhat. Az RNS tisztítási folyamata négy különböző lépésből áll: guanidium-tiocianát hozzáadása a sejtek líziséhez, fehérje denaturálás, beleértve a ribonukleázokat, az RNS elválasztása kloroform és fenol hozzáadásával, és a csapadék mosása etanollal.

TARTALOMJEGYZÉK

1. Áttekintés és a legfontosabb különbség
2. Mi a DNS extrakció?
3. Mi az RNS extrakció?
4. hasonlóságok a DNS és az RNS extrakció között
5. Összehasonlítás - DNS vs RNS extrakció táblázatos formában
6. Összegzés

Mi a DNS extrakció??

A DNS extrakció egy fizikai és kémiai eljárás, amelyet a DNS mintából történő tisztítására használnak. A DNS extrakció fontos szempont a molekuláris biológia és a kriminalisztika területén. A folyamat három alapvető lépésből áll. Kezdetben meg kell szerezni az érdekes sejteket. Ezután megkönnyítjük a sejtlízist a sejtmembrán megbontása érdekében, amely kinyitja a sejtet és kiteszi a citoplazmát a DNS-sel együtt. Felületaktív anyagokat vagy más detergenseket lehet felhasználni a lipidek lizálására a sejtmembránból, míg a jelenlévő fehérjéket proteázok katabolizálják. Ez egy választható lépés. Miután a sejt lizálódott, a katabolizált molekulák összerakódását megkönnyíti koncentrált sóoldatok. Ezt követi az oldat centrifugálása, amely elválasztja a törmeléket a DNS-től. Ebben a szakaszban a differenciált DNS-t összekeverjük a sejtciklus során alkalmazott reagensekkel és sókkal.

01. ábra: DNS extrakció

A további tisztítás érdekében a következő lépéseket lehet végrehajtani. Az egyik módszer az etanolos kicsapás, amely során jéghideg etanolt keverünk össze az elválasztott DNS-mintával. A DNS alkoholban nem oldódik, és így pellet képződik a DNS-molekulák együttes aggregációja miatt. Nátrium-acetátot adunk ehhez az eljáráshoz annak érdekében, hogy az ionerősség növelésével javítsuk a csapadék mértékét. Az etanolos kicsapási eljáráson kívül fenol-kloroform extrakciós eljárást is indíthatunk erre. Ebben a módszerben a fenol denaturálja a mintában lévő fehérjéket. Centrifugálás után a denaturált fehérjék a szerves fázisban maradnak, míg a kloroformmal kevert DNS-molekulák a vizes fázisban vannak jelen. A kloroform eltávolítja a fenolmaradékokat. Az extrakció befejezése után a DNS-t TE pufferben vagy rendkívül tiszta vízben oldjuk.

Mi az RNS extrakció??

Az RNS tisztítása egy olyan eljárás, amelynek során az RNS-t egy biológiai mintából tisztítják. A ribonukleáz jelenléte miatt a sejtekben és szövetekben ez a folyamat bonyolult. A ribonukleáz enzim képes az RNS gyors lebontására. A ribonukleázok kémiai jellege rendkívül stabil, és ezeket inaktiválni nehéz. Egy lehetőség a ribonukleázok semlegesítése. Mivel ez az enzim mindenütt jelen van a sejtekben és szövetekben, ezért speciális technikákat fejlesztettek ki az RNS extrahálására. A sok módszer közül a szokásos módszer a guanidinium-tiocianát-fenol-kloroform extrahálás.

02 ábra: RNS extrakció

A Guanidinium-tiocianát-fenol-kloroform extrakciós módszer a centrifugálástól és a fázisszétválasztástól függ. A centrifugálandó keverék vizes mintából és vízzel telített oldatból áll, amelyek fenolból és kloroformból állnak. Centrifugálás után az oldat egy felső vizes fázisból és egy alsó szerves fázisból áll semleges pH-körülmények között (pH 7-8). Az RNS jelen van a vizes fázisban. A szerves fázis tipikusan fenolban oldott fehérjékből és kloroformban oldott lipidekből áll. Hozzáadunk kaotropikus szert (olyan molekula, amely képes megbontani a hidrogénkötéseket a vízmolekulák között); ezt guanidinium-tiocianátnak nevezik. Ez a szer képes denaturálni olyan fehérjéket, amelyek ribonukleázokat tartalmaznak, amelyek lebonthatják az RNS-t és részt vesznek a sejtlízisben. Ezenkívül elválasztja az rRNS-t a riboszomális fehérjéktől. Az RNS tisztításának utolsó lépése a vizes fázis kicsapása etanollal történő mosása. Az RNS folyékony nitrogén alkalmazásával is tisztítható.

Milyen hasonlóságok vannak a DNS és az RNS extrakció között??

• Mindkét extrakciós eljárás káros vegyszereket, például fenolt és kloroformot alkalmaz.
• A centrifugálás mindkét eljárás elengedhetetlen technikája.
• Etanolt használunk a csapadék mosására és a tisztított DNS vagy RNS előállítására.

Mi a különbség a DNS és az RNS extrakció között??

DNS vs RNS extrakció
A DNS extrakció egy olyan folyamat, amely a DNS-t kivonja egy organizmusból vagy mintából.	Az RNS extrakció egy olyan eljárás, amely az RNS-t kivonja a mintából.
Lépések
A DNS extrakciós folyamat három különféle lépésből áll, két választható lépéssel.	Az RNS extrakció négy különböző lépésből áll.
reagensek
A DNS extrakcióhoz felületaktív anyagokat, proteázokat (opcionálisan), alkoholt, kloroformot, fenolt, nátrium-acetátot használunk.	Az RNS extrahálásához guanidium-tiocianátot, kloroformot, fenolt, etanolt használnak.

Összegzés - DNS vs RNS extrakció

A DNS és az RNS kivonása a molekuláris biológia, a genetika és a biotechnológia tanulmányozására szolgáló kísérleti eljárások létfontosságú elemei. Mindkét eljárás hasonló reagenseket vesz igénybe, de az RNS extrahálásánál a Guanidium-tiocianát néven ismert reagenst alkalmaznak, amely csökkenti a ribonukleázok aktivitását. Ez a fő különbség a DNS és az RNS extrakció között.

Töltse le a DNS vs. RNS extrakció PDF verzióját

Letöltheti e cikk PDF verzióját, és offline célokra felhasználhatja, az idézet megjegyzésének megfelelően. Töltse le itt a PDF verziót. A DNS és az RNS extrakció közötti különbség

Referencia:

1. Chomczynski, P és N Sacchi. „RNS-izolálás egylépéses módszer savas guanidinium-tiocianát-fenol-kloroform extrakcióval.” Analitikai biokémia., Amerikai Egyesült Államok Nemzeti Orvostudományi Könyvtára, 1987. április, elérhető itt. Belépés 2017. augusztus 31
2. Hindawi. "DNS, RNS és fehérjekivonás: A múlt és a jelen" BioMed Research International, Hindawi, 2009. november 30., elérhető itt. Belépés 2017. augusztus 31.

Kép jóvoltából:

1. Mike Seyfang „avokádóból kinyert DNS” - ​​eredetileg sikeresen elküldve a Flickrnek (CC BY 2.0) a Commons Wikimedia segítségével
2. “PhOH-CHCl3 kinyerés” Squidonius által (beszélgetés) - Saját mű (Eredeti szöveg: saját készítésű) (Public Domain) a Commons Wikimedia segítségével