Különbség a Nick Translation és az Primer kiterjesztése között

Legfontosabb különbség - Nick Translation vs Primer Extension
 

A Nick transzláció és a primer kiterjesztése két fontos módszer a molekuláris biológiában. A fő különbség a becenév fordítása és a primer kiterjesztés között az A nick-transzlációs folyamat jelzett próbákat állít elő más hibridizációs technikákhoz míg A primer kiterjesztés módszer egy adott RNS szekvenciát azonosít egy keverékből, és információt szolgáltat az mRNS expressziójáról. Mindkét technika nagy jelentőséggel bír, és rutinszerűen végzik a molekuláris kutatási laboratóriumokban.

TARTALOMJEGYZÉK
1. Áttekintés és a legfontosabb különbség
2. Mi az a Nick Translation?
3. Mi az a Primer Extension?
4. Side by side összehasonlítás - Nick Translation vs Primer Extension
5. Összegzés

Mi az a Nick Translation?

A Nick transzlációja fontos módszer a jelölt próbák előállítására különféle molekuláris biológiai technikákhoz, például blotoláshoz, in situ hibridizáció, fluoreszcens in situ hibridizáció stb in vitro DNS-címkézési módszer. A DNS-próbákat specifikus DNS- vagy RNS-szekvenciák azonosítására használjuk. Jelölt próba segítségével specifikus fragmenseket meg lehet jelölni vagy megjeleníteni egy nukleinsav komplex keverékéből. Ezért a jelölt próbákat különféle technikákkal állítják elő, amelyeket különféle technikákhoz alkalmaznak. Nick transzláció az egyik ilyen módszer, amely jelölt próbákat állít elő DNase 1 és DNS polimeráz 1 enzimek segítségével.

A nick-transzlációs folyamat a DNáz 1 enzim aktivitással kezdődik. A DNase 1 bevágásokat vezet a kettős szálú DNS foszfátvázában azáltal, hogy megbontja a foszfodiészter kötéseket a nukleotidok között. Miután létrehozták a nick-et, a nukleotid szabad 3 'OH-csoportját kapjuk, és a DNS-polimeráz 1 enzim hat rá. A DNS 1-es polimeráz 5 '- 3' exonukleáz aktivitása eltávolítja a nukleotidokat a nickből a DNS szál 3 'irányába. Ezzel egyidejűleg a DNS polimeráz 1 enzim polimeráz aktivitása működik, és nukleotidokat ad hozzá az eltávolított nukleotidok helyettesítéséhez. Ha a nukleotidokat jelölték, akkor a helyettesítés a jelölt nukleotidokkal történik, és ez jelöli a DNS-t az azonosításhoz. Ez az újonnan szintetizált jelölt DNS próbaként használható a molekuláris biológia különböző hibridizációs reakcióiban.

01. ábra: Nick fordítási folyamata

Mi az a Primer Extension??

A primer kiterjesztés egy olyan módszer, amelyet arra használunk, hogy egy RNS keverékből megismerjék a specifikus RNS szekvenciát és megtalálják az mRNS transzkriptum 5'-végét. Az RNS szerkezetének és az expressziójának tanulmányozására is felhasználják. A primer kiterjesztés módszerét jelölt primerekkel vagy jelölt nukleotidokkal hajtjuk végre. Ha jelölt primereket használunk, akkor ez kizárja a cDNS szintéziséhez használt nukleotidok címkézésének szükségességét. Ebben a technikában több lépés van. Az RNS extrahálásával kezdődik a mintából. Ezután jelölt oligonukleotid primert adunk az elegyhez a szükséges összetevőkkel együtt egy specifikus RNS szekvencia cDNS-ének szintetizálásához. Primer izzítás a keverék komplementer szekvenciájával. A primer lágyított szekvencia mint templát felhasználásával a reverz transzkriptáz enzim szintetizálja az RNS szekvencia komplementer DNS-ét (cDNS). A primer lágyítása és a reverz transzkripció csak akkor fordul elő, ha a mintában a specifikus RNS szekvencia van jelen. Végül, ha denaturáló gélelektroforézist hajtunk végre, az RNS szekvencia mérete meghatározható. Könnyű megtalálni az mRNS (transzkripciós iniciációs hely) szekvencia +1 bázisát a primer kiterjesztéses módszerrel. A mintában jelen levő mRNS mennyiségét ezen módszerrel lehet meghatározni, ha felesleges primert használunk.

02 ábra: Alapozó kiterjesztése

Mi a különbség a Nick Translation és az Primer Extension között??

Nick Translation vs Primer Extension
Nick-transzláció egy olyan folyamat, amely jelölt DNS-próbákat hoz létre a különböző hibridizációs reakciókhoz.	A primer kiterjesztés egy olyan technika, amelyet specifikus RNS megtalálására vagy a gén expresszió tanulmányozására használnak.
Használt enzimek
DNáz 1 és DNS polimeráz enzimeket használunk.	Fordított transzkriptáz enzimet használunk.
fontosság
Nick transzláció megkönnyíti a specifikus DNS-szekvencia jelölését.	A primer kiterjesztése lehetővé teszi a specifikus mRNS szekvencia méretének és a mintában lévő mennyiségének kimutatását.

Összegzés - Nick Translation vs Primer Extension

Nick transzláció a jelölt próbák szintetizálására szolgáló módszer, a DNase 1 és a DNase 1 aktivitása alapján E coli DNS polimeráz 1 enzimek. Ez egy in vitro A laboratóriumokban alkalmazott módszer a különböző hibridizációs technikák előtt. A nick-transzláció során az 1-es DNS-polimeráz 5'-3 'exonukleázaktivitása eltávolítja a nukleotidokat a nick előtt, és az 1. DNS-polimeráz aktivitása az eltávolított nukleotidokat a nick mögött jelölt nukleotidokkal helyettesíti. A primer kiterjesztés egy olyan módszer, amelyet egy adott RNS transzkriptum detektálására használnak egy keverékből, és az érdeklődésre számot tartó RNS méretének és mennyiségének meghatározására. Ez a különbség a becenév fordítása és a primer kiterjesztés között.

Irodalom
1. Reid, Alex. - Nick Translation. Springer. N.p., n.d. Web. 2017. április 18
2. “Alapozó kiterjesztése.” Nemzeti diagnosztika. N.p., n.d. Web. 2017. április 19
3. Kuo, M. T. és W. Plunkett. "A metafázisos kromoszómák Nick-fordítása: a nukleáz-túlérzékeny régiók in vitro jelölése a kromoszómákban." Az Amerikai Egyesült Államok Nemzeti Tudományos Akadémia folyóiratai. Amerikai Egyesült Államok Nemzeti Orvostudományi Könyvtára, 1985. február. Web. 2017. április 19
4. Raymond et al. "Egyszerű, kvantitatív primer-kiterjesztésű PCR-teszt a mikroRNS-ek és a rövid interferenciájú RNS-ek közvetlen monitorozására." RNS-t. Copyright 2005, RNA Society, 2005. november. Web. 2017. április 19

Kép jóvoltából:
1. “Primer Extension Assay” Jjnmmnjj - Saját munka (CC BY-SA 3.0) a Commons Wikimedia segítségével