Különbség a meleg és a hideg tripszinizáció között

Fő különbség - meleg vs Hideg tripszinezéssel
 

A meleg és a hideg tripszinizálás két módszer, amelyet az állati sejttenyésztés során a sejtek enzimatikus bontásában használnak. Az kulcs különbség a meleg és a hideg tripszinizáció között, amint a nevek sugallják, attól a hőmérséklettől függ, amelyen a tripszint hozzáadják a sejtek bontásához. A meleg tripszinizáció magasabb hőmérsékleti körülmények között zajlik (36,5-37 ° C) ⁰C) mivel a hideg tripszinizáció alacsony hőmérsékleten zajlik.

Az állati sejtek primer sejttenyésztésénél három fő módszer került felhasználásra, amelyek sikeresnek bizonyultak. A három módszer magában foglalja a sejtek mechanikai bontását, a sejtek enzimatikus bontását és az elsődleges expressziós technikát. A sejtek enzimatikus bontása a sejtek izolálásához vezet, és ezt a fehérjét lebontó tripszin enzim végzi. Ezért ezt a folyamatot tripszinizációnak nevezik. A tripszinizációt kétféle körülmények között lehet elvégezni, nevezetesen a meleg tripszinizációt és a hideg tripszinizációt. A meleg tripszinizáció a sejtek tripszinnel történő kezelésének meleg körülmények között, 36,5 - 37 ° C hőmérsékleten történő kezelése ⁰C. A hideg tripszinizálás a tripszinkezelés folyamata, amely hidegebb körülmények között zajlik, lehetőleg jégben, nagyon alacsony hőmérsékletet fenntartva..

TARTALOMJEGYZÉK

1. Áttekintés és a legfontosabb különbség
2. Mi a meleg tripszinizáció?
3. Mi a hideg tripszinizálás?
4. A meleg és a hideg tripszinizáció hasonlóságai
5. Összehasonlítás egymással - meleg vs hideg tripszinizálás táblázatos formában
6. Összegzés

Mi a meleg tripszinizáció??

A tripszinizáció elvégezhető a sejtkomponensek szétesése céljából, hogy a sejteket elkülönítsék primer sejttenyészet előállítása céljából. A tripszin egy fehérjebontó enzim, és a tripszinizáláshoz használt enzimkeverék lehet nyerskivonat vagy tisztított termék. A nyers kivonatról azt mondják, hogy hatékonyabb a fehérje lízisében és a sejtek szétesésében, mivel más degradáló enzimeket tartalmaz.

A meleg tripszinizálás a leggyakrabban használt enzimatikus módszer a sejtek elbontására, magasabb hőmérsékleti körülmények között zajlik le. A tripszinnel történő kezelés előtt a kívánt szövetet apróra darabolják. Megkönnyíti a könnyű bontási folyamatot. Az aprított szövetet ezután speciális tápközegben mossuk, amelyet Dissection Basal Salt táptalajnak hívunk.

A mosási lépés befejezése után a sejteket egy lombikba transzformáljuk, amely aktív enzimet, a tripszint tartalmaz. Mivel ez a technika meleg tripszinizációs protokollt igényel, a tripszint körülbelül 37 ° C hőmérsékleten helyezzük ⁰C körülbelül négy órán át.

01. ábra: tripszin

A tartalmat összekeverjük és centrifugálási módszerekkel keverjük, a protokoll megkönnyítése és a felbomlás gyorsítása érdekében. Az ajánlott idő elérése után a sejtek származtathatók a felülúszóból. A felülúszóból származó sejteket ezután egy meghatározott hőmérsékleten és időben inkubáljuk.

Mi az a hideg tripszinizáció??

A hideg körülmények között zajló tripszinizálás másik típusa a hideg tripszinizálás. Ebben a technikában az aprított és mosott sejteket fiolákba helyezzük jégen, majd tripszinnel átitatjuk. Az áztatás időtartama sokkal hosszabb - körülbelül 6 - 24 óra.

Az áztatási eljárás befejezése után a tripszint eltávolítják a sejtlizátumból, és a szövetdarabokat 37 ° C-on inkubálják. ⁰C körülbelül 20-30 percig. A sejtek szétesését a szövetkeverék ismételt pipettázásával érjük el. Ez lehetővé teszi, hogy a sejtek disszociálódjanak a membránról és eljussanak a felülúszóhoz. Amint a sejtek a felülúszóban vannak, inkubálják és a kívánt hőmérsékleten és időtartamon keresztül növesztik.

A hideg tripszinizációs módszernek számos előnye van

• Az életképes sejtek magasabb hozama, mivel a sejtkárosodást minimalizálják. A sejtkárosodást minimalizáljuk, ha centrifugálási lépéseket nem alkalmazunk.
• Nagyon kényelmes módszer.
• Kevésbé munkaigényes.

A hideg tripszinizálási módszer fő korlátozása az, hogy egyetlen esetben nagy mennyiségeket nem lehet felhasználni.

Mik a hasonlóságok a meleg és a hideg tripszinizáció között??

• Mind a meleg, mind a hideg tripszinizációs folyamat a tripszin enzimet használja fel a sejtek elbontására.
• A meleg és a hideg tripszinizálási folyamatot egyaránt alkalmazzuk a sejttenyésztési eljárásokban a sejtek bontására.
• Mind a meleg, mind a hideg tripszinizációs kezelési eljárás során a sejteket a felülúszóból nyerik.

Mi a különbség a meleg és a hideg tripszinizálás között??

Meleg vs hideg tripszinizálás
A meleg tripszinizáció a sejtek tripszinnel történő kezelésének meleg körülmények között, 36,5 - 37 ° C hőmérsékleten történő kezelése 0.	A hideg tripszinizálás a tripszinkezelés folyamata, amely hidegebb körülmények között zajlik, lehetőleg jégben, nagyon alacsony hőmérsékletet fenntartva.
Jegyzőkönyv
Az aprított szöveti darabokat 37 ° C-on tartjuk 0C folyamatosan az egész eljárás során.	Az aprított szöveti darabokat kezdetben jéghideg hőmérsékleten tartják, majd 37 ° C-on tartják 0.
Hőfok
A meleg tripszinizáció 36,5 - 37 ° C-on történik 0	A hideg tripszinizáció jéghideg hőmérsékleten történik.
Idő eltelt
Kevesebb idő szükséges a meleg tripszinizálás teljes folyamatához (körülbelül 4 óra).	Hosszabb idő szükséges (körülbelül 6 - 24 óra) a hideg tripszinizáláshoz.
Az életképes sejtek hozama
Alacsony meleg tripszinizáció.	Magas a hideg tripszinizáció.
Centrifugálás használata
Centrifugálásra van szükség a meleg tripszinizálás során a sejtek elbontásához.	Centrifugálás nem szükséges a hideg tripszinizálás során.
Kezdeti szövetmennyiség a tripszinizációhoz
Nagyobb mennyiségű szövet használható meleg tripszinizációhoz.	Kis mennyiségű szövet használható hideg tripszinizáláshoz.
Sejtkárosodás
Magas a meleg tripszinizálás során végzett centrifugálás miatt.	Kevésbé a hideg tripszinizáció miatt.

összefoglalás - Meleg vs Hideg tripszinezéssel

A tripszinizálás a fehérjéket lebontó tripszin enzim primer sejttenyészetek bontására és előállítására történő felhasználásának módszere a sejttenyésztés során. Az eljárás során alkalmazott hőmérsékleteken alapuló két fő tripszinizációs módszer létezik. Meleg és hideg tripszinizálás. A meleg tripszinizálást 37 ° C-on végezzük ⁰C mivel a hideg tripszinizálást jéghideg körülmények között végzik. Noha a hideg tripszinizálás hosszabb időt vesz igénybe a befejezésig, azt állítják, hogy az életképes sejtek magasabb hozammal rendelkeznek. Ennek oka az a tény, hogy a sejtkárosodást minimálisra csökkentik a hideg tripszinizálás során, mivel nem alkalmaznak erőteljes centrifugálási lépéseket. Ez a különbség a meleg és a hideg tripszinizálás között.

Referencia:

1. „tripszinezéssel.” Tripszinizálás - áttekintés | ScienceDirect témák. Itt érhető el 
2. „Elsődleges sejttenyésztés: 3 technika (diagrammal).” Biológiai vita, 2015. október 16. Elérhető itt  

Kép jóvoltából:

1.'Kísérje meg az aktív oldalt «Fyraddel - Saját munka, (CC BY-SA 3.0) a Commons Wikimedia-on keresztül