Különbség a benzonáz és a DNáz között

Fő különbség - Benzonáz vs DNáz
 

A nukleinsavak lebomlása számos molekuláris biológiai technika szempontjából fontos. Széles körben használják a rekombináns DNS-technológiában a DNS és az RNS nem kívánt fragmenseinek megszabadítására. A nukleinsavat lebontó enzimeket nukleázoknak nevezzük, és a kívánt funkció alapján különböző típusúak lehetnek. A DNS-t lebontó nukleázokat DNázoknak nevezzük, míg az RNS-t lebontó nukleázokat ismert RNázoknak nevezzük. Ezeket az enzimeket leginkább a in vitro kísérletek, ahol ban ben vitro molekuláris teszteket végeznek a tiszta DNS, RNS vagy fehérjék izolálására. A benzonázok egyfajta nukleázok, amelyek mind a DNS-t, mind az RNS-t lebontják, míg a DNázok csak a DNS-t bontják le. Ez a legfontosabb különbség a Benzonase és a DNase között.

TARTALOMJEGYZÉK

1. Áttekintés és a legfontosabb különbség
2. Mi a benzonáz?
3. Mi a DNase?
4. hasonlóságok a benzonáz és a DNase között
5. Összehasonlítás - Benzonase vs DNase táblázatos formában
6. Összegzés

Mi a Benzonase??

A benzonáz egy genetikailag módosított endonukleáz a Serratia marcescens. Ezt az enzimet Romániában termelik E. coli házigazdák ipari méretben. A benzonáz képes kettős szálú DNS-t, lineáris DNS-t, körkörös DNS-t és egyszálú RNS-t hasítani. Így a benzonáz kereskedelmi szempontból fontos. A benzonáz enzim egy protein dimer, amely 245 azonos aminosavat tartalmaz, ~ 30 kDa alegységgel, két esszenciális diszulfidkötéssel. A benzonáz hasítja a nukleinsavakat az 5 'végén, és olyan fragmenseket eredményez, amelyek szabad 5' végűek. A benzonáz bármilyen szekvencián hasíthat nukleinsavakat, de előnyben részesíti a GC-ben gazdag régiókat.

A benzonázt -20 ° C-on tároljuk ⁰C. Az enzimaktivitás optimális pH-ja 8,0 - 9,2. A Benzonase alkalmazásai között szerepel a minta előkészítése a 2D fehérje gélelektroforézishez, ahol a Benzonase eltávolítja a kötött nukleinsavakat, és a nukleinsavszennyeződések eltávolítását a rekombináns fehérjekészítményekből. Arra is felhasználják, hogy csökkentsék a fehérjekivonatok viszkozitását, és megakadályozzák a sejtek összerakódását a sejtkeverékben.

Mi a DNase??

A DNáz egy nukleáz, hidrolitikus enzim, amely csak a kettős szálú DNS hasítására képes. A DNázok két fő típusa van: DNase I és DNase II. A DNáz I részt vesz a kettős szálú DNS hasításában 5 'szabad végű polinukleotidok előállításához. A DNáz II részt vesz a kettős szálú DNS hasításában 3 'szabad végű vagy túlnyúló polinukleotid szál előállításához.

DNáz I

A DNase I optimális pH-értékkel működik, 7,0 - 8,0 között. Az enzimaktivitás számos ionos kofaktoron múlik, beleértve a Ca-t²⁺, mg²⁺ vagy Mn²⁺. Az Mg tevékenysége²⁺ és Mn²⁺ határozza meg a DNáz I funkcióját. Mg jelenlétében²⁺, A DNáz I függetlenül hasítja a dsDNS minden szálát. Ez véletlenszerűen zajlik. Ezzel szemben Mn jelenlétében^2+, az enzim mindkét DNS-szálat körülbelül ugyanabban a helyen hasítja. Ez a hasítás két típusú DNS-fragmenst eredményez; az egyik tompa végű, egy másik egy vagy két nukleotid túlnyúlással rendelkezik.

02 ábra: DNáz

DNáz II

A DNase II optimális 4,5-5,0 pH mellett működik, és aktivitásához kétértékű fémionokra van szükség, hasonlóan a DNase I-hez. A DNase II mechanizmusa ismerten három fő lépésből áll..

1. Több egyszálú törést indukálunk a DNS gerincében.
2. Savas oldódó nukleotidokat és oligonukleotidokat állítanak elő.
3. A nemlineáris hiperkrómikus eltolás az utolsó fázisban fordul elő.

A DNáz enzim fő gátlói a fémkelátok, az átmeneti fémek és a vegyi anyagok, például a nátrium-dodecil-szulfát és a β-merkaptoetanol..

A DNáz fő alkalmazásai közé tartozik a DNS-mentes RNS-extraktumok és fehérjekivonatok előállítása, valamint a templát-DNS eltávolítása in vitro transzkripciós kísérletek során.

Milyen hasonlóságok vannak a Benzonase és a DNase között??

• Mindkettő hidrolitikus enzim.
• Mindkettő nukleázok.
• Mindkettő részt vesz a nukleinsavak foszfodiészter-kötéseinek megbontásával.
• Mindkettő optimális pH-értéket és tárolási hőmérsékletet igényel az enzim aktivitásának fenntartása érdekében.
• Az enzimek gátlói a kelátképző szerek, az átmeneti fémek és a mosószerek.
• Az alkalmazások elsősorban a nagy tisztaságú DNS, RNS és fehérjék kivonatok előállítására koncentrálnak.
• Mindkét enzimet elő lehet állítani géntechnológiával.

Mi a különbség a benzonáz és a DNase között??

Benzonáz vs DNáz
A benzonáz olyan enzim, amely képes kettős szálú DNS, lineáris DNS, körkörös DNS és RNS hasítására.	A DNáz egy enzim, amely képes kettős szálú DNS hasítására.
Hordozó az enzimhez
Mind a DNS, mind az RNS a benzonáz szubsztrátjai.	A DNS a DNáz szubsztrátja.
Szerkezet
A benzonáz optimális pH-tartománya 7,0 - 8,0	A DNáz I optimális pH-tartománya 7,0 - 8,0, a DNáz II pedig 4,5 - 5,0.

Összegzés - Benzonase vs DNase

A nukleáz enzimeket széles körben használják különféle kísérleti eljárásokban a molekuláris biológia és a géntechnika szempontjából. A benzonáz és a DNáz nukleázok két típusa. A benzonáz részt vesz mind a DNS, mind az RNS lebontásában, míg a DNáz a kettős szálú DNS hasításában vesz részt. Ez az alapvető különbség a benzonáz és a DNáz között. Jelenleg mindkét nukleáz-típust rekombináns DNS-technológiával állítják elő, amely magasabb minőségű enzimeket eredményez, amelyeket a maximális termeléshez optimalizálnak.

Töltse le a Benzonase vs DNase PDF verzióját

Letöltheti e cikk PDF verzióját, és offline célokra felhasználhatja, az idézet megjegyzésének megfelelően. Kérjük, töltse le itt a PDF verziót. Különbség a Benzonase és a DNase között

Irodalom:

1. „Dezoxiribonukleáz I a D5025 szarvasmarha hasnyálmirigyből”. Sigma-Aldrich, elérhető itt. Belépés 2017. szeptember 19-én.
2. „Dezoxiribonukleáz II.” Dezoxiribonukleáz II - Worthington enzim kézikönyv, elérhető itt. Belépés 2017. szeptember 19-én.

Kép jóvoltából:

1. „DNS-ben túlérzékeny hely”: Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. - Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. (2012) Összefüggés a DNase I túlérzékeny hely eloszlása ​​és a gén expresszió között a HeLa S3 sejtekben. PLOS ONE 7 (8): e42414. doi: 10.1371 / journal.pone.0042414 (CC BY-SA 2.5) a Commons Wikimedia-on keresztül