Különbség a klónozás és a szubklónozás között

Fő különbség - klónozás vs szubklónozás
 

A klónozás és a szubklónozás molekuláris biológiai eljárások, amelyek genetikailag azonos sejteket vagy organizmusokat hoznak létre az érdeklődésre számot tartó DNS-sel vagy génnel. A klónozás olyan eljárás, amely magában foglalja az érdekelt gén vagy DNS vektorba történő beillesztését, replikálódását egy gazda baktériumban, és olyan sejtek vagy szervezetek előállítását, amelyek a genetikai összetétel pontos másolatai. A szubklónozás olyan eljárás, amely magában foglalja a kérdéses gén beillesztését, amely már be van építve egy vektorba, egy szekunder vektorba, replikálódik egy gazda baktériumban, és a sejtek vagy organizmusok genetikailag azonos másolatainak előállítása. A legfontosabb különbség a klónozás és a szubklónozás között az, a klónozás során a vektorba ligálva a kérdéses gén folytatja a klónozási folyamatot, míg a szubklónozás során a már klónozott érdeklődő gént elválasztják a szülő vektortól, majd ismét beillesztik egy recipiens vektorba, és folytatják a folyamatot.

TARTALOMJEGYZÉK
1. Áttekintés és a legfontosabb különbség
2. Mi a klónozás?
3. Mi a szubklónozás?
4. Összehasonlítás egymással - Klónozás vagy szubklónozás
5. Összegzés

Mi a klónozás??

A klónozás olyan eljárás, amely genetikailag azonos organizmusokat vagy sejteket termel. A természetben a klónozás az aszexuális szaporodás útján történik. Ha nincs genetikai rekombináció vagy megváltozás, a lányos sejtek ugyanazt a genetikai összetételt kapják, mint a szülő. A prokarióta és eukarióta organizmusok bináris hasadással, bimbózóval, mitózissal stb. Hoznak létre klónokat. A molekuláris biológiában a DNS-klónozási gének vagy specifikus fragmensek egy népszerű módszer az adott DNS-szakasz szerkezetének és működésének tanulmányozására..

A molekuláris klónozás fő célja az érdeklődésre számot tartó DNS-fragmenst (főleg géneket) hordozó, genetikailag azonos sejtek vagy szervezetek millióinak másolatainak elkészítése. Olyan organizmusokat hoz létre, amelyek pontos genetikai másolatait tartalmazzák. Elsősorban a specifikus géneket a molekuláris vizsgálatok során klónozzák a szerkezeti és funkcionális információk megszerzése, valamint a DNS szekvenálás céljából. Ezenkívül a specifikus fehérjék vagy termékek nagy léptékű előállításához széles körben alkalmazzák a klónozást.

Klónozási eljárás

A klónozási eljárás alapvető lépései a következők.

1. A kérdéses gén azonosítása és izolálása. (A kérdéses gén amplifikálása PCR-rel).
2. A kérdéses gén restrikciós emésztése (Restrikciós endonukleáz hasítja a gént).
3. A vektor DNS restrikciós emésztése. (A vektor DNS-t ugyanazzal a restrikciós endonukleázzal vágjuk le).
4. A gén beillesztése a vektorba és a rekombináns molekula kialakulása.
5. A rekombináns vektor transzformációja gazda baktériummá.
6. A transzformált baktériumok izolálása és azonosítása (a plazmidvektornak szelektálható gént kell tartalmaznia, leggyakrabban egy antibiotikumrezisztencia-gént a transzformált baktériumok szűrésére).
7. Rekombináns gén expresszió a gazdaszervezetben.

Ábra: Klónozási eljárás

Mi a szubklónozás??

A szubklónozás egy eljárás, amellyel az érdeklődő gént egyik vektorból a másikba mozgatjuk, hogy megtekintsük a gén expresszióját, hogy megkapjuk a gén kívánt funkcionalitását. Ebben az eljárásban két vektor vesz részt; nevezetesen a szülő vektor és a cél vektor. A klónozott betéteket ismét egy második vektorba helyezzük az alklónozás során. A génnek az első vektorból a második vektorba történő átvitelének célja olyan dolgok előállítása, amelyeket az első vektor nem tudott megtenni, vagy egy gén újbóli elválasztása a DNS már klónozott fragmentumán belül, és önmagában kifejezés. A restrikciós enzimeket ebben az eljárásban használják az elején.

Szubklónozási eljárás

A szubklónozás alapvető lépései a következők.

1. Restrikciós endonukleázok segítségével elválasztjuk a vizsgált DNS-t a donor plazmidban (szülő vektor).
2. A kérdéses DNS amplifikálása PCR segítségével.
3. A PCR termék (érdekes DNS) tisztítása gélelektroforézissel.
4. A recipiens plazmid megnyitása ugyanazon restrikciós endonukleázokkal, amelyek az érdeklődésre számot tartó DNS szétválasztására szolgálnak a szülő plazmidban.
5. A kérdéses DNS (gén) ligálása a recipiens plazmidba az alklónozott plazmid létrehozása céljából.
6. A szubklónozott vektor transzformációja kompetens gazda baktériummá.
7. A transzformált sejtek szűrése.
8. A plazmid DNS tisztítása és felhasználása a DNS szekvenálására vagy a gének expressziójára a kívánt termékek előállítása céljából.

A szubklónozást egy génnek a klónozott géncsoportból történő izolálása alkalmával hajtják végre, vagy amikor az érdeklődő gént át kell helyezni egy hasznos plazmidba, hogy megnézhesse a kérdéses gén pontos funkcióját.

Ábra: Szubklónozási eljárás

Mi a különbség a klónozás és a szubklónozás között??

Klónozás vs szubklónozás
A klónozás olyan eljárás, amely genetikailag azonos organizmusokat vagy sejteket termel.	A szubklónozás egy eljárás, amelynek során az érdeklődő gént egyik vektorból a másikba mozgatjuk, hogy megnézhessük a gén expresszióját, hogy megkapjuk a gén kívánt funkcionalitását..
Folyamat
Válasszuk szét az érdeklődésre számot tartó DNS-t a szervezettől, egyszer beiktatunk egy vektorba, és klónozzuk	A már klónozott DNS-t elválasztjuk az első vektortól, beillesztjük egy második vektorba és klónozzuk.
Helyezze be a mozgást vektorokon keresztül
Nem mozgatja a betéteket (az érdekes DNS-t) az egyik vektorból a másikba.	Helyezze át a beszúrásokat a szülő vektorból a cél vektorba.

Összegzés - Klónozás vs szubklónozás

A klónozás genetikailag azonos sejteket vagy organizmusokat hoz létre az érdeklődésre számot tartó beépített génnel vagy DNS-sel. Ez a kérdéses DNS elválasztásán és egy vektorba történő beillesztésén és a gazda baktériumon belüli expresszión keresztül megy végbe. Az szubklónozás hasonló lépéseket mutat a klónozással. A szubklónozás során azonban a már klónozott DNS-fragmenst (érdeklődésre számot tartó gént) beiktatjuk egy vektorba, és transzformáljuk gazdabaktériumba. Ez a legfontosabb különbség a klónozás és a szubklónozás között.

Irodalom

1. Lodish, Harvey. "DNS-klónozás plazmidvektorokkal." Molekuláris sejtbiológia. 4. kiadás. Amerikai Egyesült Államok Nemzeti Orvostudományi Könyvtára, 1970. január 1., web. 2017. március 05
2. „Szubklónozása.” Wikipedia. Wikimedia Alapítvány, 2017. február 14. Web. 2017. március 06
3. „Szubklónozása.” Szubklónozás | Nyílt hozzáférésű cikkek | Open Access folyóiratok Konferencia előadások Szerkesztők | Szerzők | Olvasók | tudományos események. N.p., n.d. Web. 2017. március 06
4. Wackerhage, Henning. - Hogyan szubklónozhatom. Hogyan szubklónozzuk. N., 1970. január 1., Web. 2017. március 06

Kép jóvoltából

1. Molekuláris klónozási eljárás - CNX OpenStax [CC BY 4.0] útján, a Wikimedia Commons segítségével
2. Szubklónozási eljárás - Az eredeti feltöltő Takometer volt az angol Wikipedia-n (átvitték az en.wikipedia-ból a Commons-ba.) [CC BY 2.5], a Wikimedia Commonson keresztül