Különbség a közvetlen és a közvetett ELISA között

Fő különbség - Közvetlen vagy közvetett ELISA
 

Az enzimhez kapcsolt immunoassay (ELISA), más néven enzim immunoassay, szerológiai vizsgálat, amely kimutatja a vérben antitesteket. Diagnosztikai eszközként szolgál annak megállapítására, hogy a beteg adott vírusnak vagy más fertőző szernek (antigénnek) van-e kitéve, és hogy a szervezet antitesteket hozott-e létre a fertőzés ellen. Az ELISA képes azonosítani a múltbeli és jelenlegi fertőzéseket. Ezért az ELISA-t gyakran használják előszűrő tesztként az orvosok előtt a betegségek mélyreható elemzése előtt. Ezt a tesztet a laboratóriumban úgy lehet elvégezni, hogy vérmintát vesz a betegtől. Kétféle ELISA teszt létezik: közvetlen ELISA és közvetett ELISA. A közvetlen és közvetett ELISA közötti fő különbség az a közvetett ELISA érzékenyebb és másodlagos antitest hozzáadását igényli míg közvetlen ELISA kevésbé érzékeny, és csak primer antitestet használ.

TARTALOMJEGYZÉK
1. Áttekintés és a legfontosabb különbség
2. Mi a közvetlen ELISA?
3. Mi az a közvetett ELISA?
4. Összehasonlítás egymással - Közvetlen és közvetett ELISA
5. Összegzés

Mi a közvetlen ELISA??

Az ELISA egy betegség diagnosztikai tesztje, amelyet bizonyos antigének vagy ellenanyagok jelenlétének a vérében történő meghatározására végeznek. Lemezvizsgálatként végezzük. Könnyen vizsgálható enzimekkel kapcsolt antitesteket használ. Az antigének jelenléte a szérummintában az enzimekhez kapcsolt specifikus antitestekkel kötődik. Az utolsó lépésben egy specifikus szubsztrátot adunk az enzimmel való reakcióhoz. Az enzim átalakítja a szubsztrátot színes vagy szignál-termelő termékré. A kémiai szubsztrátum színváltozása egy adott antitest jelenlétét mutatja a szérum mintában. A közvetlen ELISA teszt csak az enzimhez kapcsolt primer antitestet használ. Az antigénhez való kötés után gyorsan megváltoztatja a színét, jelezve a fertőző ágens jelenlétét a vérben. A közvetlen ELISA-ban azonban a jelek intenzitása gyengébb, mivel az epitópok az antigének megkötésére korlátozódnak. Ezért a közvetlen ELISA kevésbé érzékeny a közvetett ELISA-hoz képest.

01. ábra: Közvetlen ELISA teszt

Mi az a közvetett ELISA??

Az ELISA-t kétféle antitest felhasználásával hajthatjuk végre, nevezetesen; elsődleges antitest és szekunder antitest. Az indirekt ELISA eszköz mindkét típusú antitestet használ a jelek amplifikálására a jobb kimutatás érdekében. Az indirekt ELISA technikát az alábbiak szerint hajtjuk végre.

1. A lemezeket antigénekkel inkubáljuk, és a nem-specifikus kötés blokkolására mossuk.
2. Ezután primer antitesteket adunk hozzá és mossuk.
3. Enzimhez kapcsolt szekunder antitestet adunk hozzá és mossuk.
4. Hozzáadunk egy szubsztrátot, és hagyjuk reagálni enzimekkel.
5. A jeleket detektáljuk, és meghatározzuk a specifikus antigén jelenlétét vagy hiányát a mintában.

Közvetett ELISA teszt során több szekunder antitest kötődik egyetlen primer antitesthez. A másodlagos antitesteket könnyen vizsgálható enzimekkel kapcsolják össze. Ezért egy kötés erős jelzést adhat egynél több kölcsönhatás miatt. Ezért a közvetett ELISA érzékenyebb, mint a közvetlen ELISA. A közvetett ELISA azonban nem specifikus jeleket adhat a szekunder antitestek keresztreakciói miatt.

02 ábra: Indirekt ELISA teszt

Mi a különbség a közvetlen és az indirekt ELISA között??

Közvetlen vagy közvetett ELISA
A közvetlen ELISA kevésbé érzékeny, mint a közvetett ELISA.	A közvetett ELISA érzékenyebb.
Eltelt idő
A közvetlen ELISA teszt gyors folyamat.	A közvetett ELISA időigényes.
Antitestek használata
Csak egyfajta antitestet (primer antitestet) használnak a közvetlen ELISA-ban.	Primer és szekunder antitesteket használunk közvetett ELISA-hoz.
Kapcsolat az enzimekkel
A primer antitestek össze vannak kapcsolva enzimekkel.	A másodlagos antitestek össze vannak kapcsolva enzimekkel.
A második antitest keresztreaktivitása
A közvetlen ELISA kiküszöböli a második antitestek keresztreaktivitását.	A közvetett ELISA-t befolyásolja a második antitestek keresztreaktivitása.
Jelzések
A jelek gyengék a közvetett ELISA-hoz képest.	A jeleket közvetett ELISA módszerrel erősítjük meg. Ezért könnyen észlelhető.

Összegzés - Közvetlen és közvetett ELISA

Az ELISA biokémiai módszer, amelyet főként az immunológiában alkalmaznak antitest vagy antigén jelenlétének kimutatására a beteg vérmintájában. Ezt két, közvetlen vagy közvetett ELISA néven ismert eljárással hajthatjuk végre. A közvetlen ELISA teszt csak primer antitesteket alkalmaz az antigén kimutatására, míg a közvetett ELISA primer és szekunder antitesteket is felhasznál. A közvetlen ELISA-ban az elsődleges antitestek vannak jelölve, míg a közvetett ELISA-ban a másodlagos antitestek vannak jelölve. Ez a különbség a közvetlen és a közvetett ELISA között.

Irodalom
1. "Az enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat (ELISA)." Az Egészségügyi Világszervezet hírlapja. Amerikai Egyesült Államok Nemzeti Orvostudományi Könyvtára, 1976. Web. 2017. március 29
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen és J. Van Der Veen. „Enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat, amely jelölt antigént használ az immunoglobulin M és A antitestek kimutatására toxoplazmózisban: összehasonlítás közvetett immunfluoreszcenciával és kettős szendvics enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálattal.” Journal of Clinical Microbiology. Amerikai Egyesült Államok Nemzeti Orvostudományi Könyvtára, 1983. június. Web. 2017. március 29

Kép jóvoltából:
1. Cavitri „ELISA diagram” - Saját munka (CC BY 3.0) a Commons Wikimedia segítségével 
2. „Közvetett ELISA”: Cawang - Saját munka (CC0) a Commons Wikimedia-on keresztül