Különbség a GFP és az EGFP között

Az kulcs különbség A GFP és az EGFP között az, hogy A GFP az vad típusú fehérje, amely beépül a nem emlős sejtek molekuláris klónozásába, míg az EGFP egy továbbfejlesztett vagy módosított GFP típus, amely emlős sejteken használható.

A molekuláris klónozás olyan fejlett technika, amelyet a tudósok rendkívül nagy mértékben alkalmaznak a fehérjék rekombináns technológián keresztüli expresszálására. A rekombináns DNS technológiában szükséges a rekombináns vektor sikeres átalakítása a gazdaszervezethez. Ezért a transzformációs folyamat során meg kell határozni és igazolni kell, hogy a kérdéses gén transzformálódott-e vagy sem a gazdaszervezetben. Ennek értékelésére a molekuláris biológusok számos technikát alkalmaznak. Ezen technikák közül az egyik a riportergén. Ezek a riportergének választható markerekként működnek a megfelelő transzformánsok kiválasztásához. Így a zöld fluoreszcens protein (GFP) és az fokozott zöld fluoreszcens protein (EGFP) két riporterfehérje, amelyeket a molekuláris klónozásban használnak.

TARTALOMJEGYZÉK

1. Áttekintés és a legfontosabb különbség
2. Mi a GFP?
3. Mi az EGFP?
4. hasonlóságok a GFP és az EGFP között
5. Side by side összehasonlítás - GFP vs EGFP táblázatos formában
6. Összegzés

Mi a GFP??

A GFP egy vad típusú protein, amely 238 aminosavmaradékot és számos szelektálható régiót tartalmaz az aminosavszekvenciák számára, amelyek megkülönböztetik a többi fluoreszcens fehérjétől. Ezenkívül ez a vad típusú protein eredetileg izolált volt a Aequorea Victoria; egyfajta medúza. Természetes jelenségekben azonban a medúza képes bizonyos ingerekre reagálva zöld színű fluoreszcenciát produkálni.

Korábban ez a koncepció meglepte a tudósokat, és úgy döntöttek, hogy rekombináns DNS technológiáikban alkalmazzák. Következésképpen a tudósok a vad típusú génnek ezt a mutáns formáját riportergénként használták génexpressziós tanulmányaikban. A GFP vad típusú génje olyan fehérjét képes előállítani, amely szobahőmérsékleten vagy UV-fény alatt fluoreszcenciát ad. Ezért, amikor beillesztik a transzformánsokba, expresszálja és előállítja fluoreszcenciát. Ha a fluoreszcencia a transzformációs folyamat után jön létre, akkor ez megerősíti a transzformációs folyamat sikerét. Egyszerű szavakkal: a fluoreszcenciakibocsátás jelzi az érdekes gént hordozó vektor sikeres transzformációját a gazdaszervezetben.

01. ábra: GFP

Ezért a GFP a in vivo a gén expressziójának markere. Jelenleg géntechnikai technikák vannak használatban a GFP előállításához. A GFP számos továbbfejlesztett verziója, például az EGFP is elérhető. Ez tehát lehetővé teszi a GFP hatékony felhasználását a molekuláris klónozásban és a gén expressziós vizsgálatokban.

Mi az EGFP??

A továbbfejlesztett zöld fluoreszcens protein vagy az EGFP a GFP továbbfejlesztett változata. Egyszerű szavakkal definiálhatjuk az EGFP-t a vad típusú GFP tervezett verziójaként. Amikor a GFP vad típusú génje mutálódik, akkor jótékony hatásokat vált ki. Ezért a GFP mutált génje lehetővé teszi új karakterek kifejezését, és ennek eredményeként javított tulajdonságokkal rendelkező Enhanced GFP-t állíthatunk elő. Ezenkívül a vad típusú GFP génbe besugárzás vagy kémiai módszerek segítségével sikeresen bevezethetjük a mutációkat. Ezek a mutált gének azután előállítják az EGFP-t, amelynek kedvezőbb tulajdonságai vannak.

02 ábra: EGFP

Az EGFP továbbfejlesztett jellemzői a következők:

• Erõsebb fluoreszcencia jeleket bocsáthat ki.
• Magas érzékenységgel rendelkezik.
• Prokarióták és más alacsonyabb szintű eukarióták helyett emlős sejteken használható.
• Ezenkívül megnöveli a termék tisztaságát.

Ezért a GFP-hez képest az EGFP az előnyben részesített választás a génexpressziós vizsgálatok során. A termék azonban drágább, mint a GFP.

Milyen hasonlóságok vannak a GFP és az EGFP között??

• A GFP és az EGFP két fehérje, amelyek képesek zöld színt bocsátani ki
• Ezért mindkettő riporterfehérjékként funkcionál a génexpressziós vizsgálatokban.
• Lehetőség van mindkettő szintetizálására rekombináns DNS technológiával.
• Sőt, könnyű tovább módosítani ezt a két típust a továbbfejlesztett formák szintetizálása céljából.

Mi a különbség a GFP és az EGFP között??

A riportergén olyan gén, amely kapcsolódik a rekombináns DNS-technológiában érdekes génhez. Ez jelzi a rekombináns vektor sikeres transzformációját a gazdaszervezetre. Itt a GFP és az EGFP a zöld fluoreszkáló fehérjék két típusa, amelyek riporterfehérjékként működnek. A GFP és az EGFP közötti fő különbség azonban az, hogy a GFP vad típusú, míg az EGFP a GFP tervezett változata. Ezenkívül az EGFP-nek több jótékony tulajdonsága van, mint a GFP-nek. Például az EGFP erősebb fluoreszkáló fényt bocsát ki és érzékenyebb, mint a GFP. A GFP és az EGFP közötti másik különbség az a rendszer, amelyben ezeket felhasználhatjuk. A nem emlősrendszerek a GFP-t használják, míg az emlősrendszerek az EGFP-t használják.

Az alábbi infographic táblázatokban mutatja be a GFP és az EGFP közötti különbséget.

Összegzés - GFP vs EGFP

A GFP és az EGFP riporterfehérjék a molekuláris klónozás és a gén expressziós vizsgálatok során. A GFP a vad típusú protein, amely zöld fluoreszcens fehérje. A fehérje kezdetben izolálva volt a medúzától Aequorea victoria. Ezzel szemben az EFGP a GFP protein fokozott formája. Ez vad típusú mutáns, javított tulajdonságokkal. Ezért az EFGP nagyobb a jelerősség és a nagyobb érzékenység. Ezért emlősökön át alkalmazhatjuk. Ezzel szemben a GFP elsősorban nem emlősökön lévő vektorokon alkalmazható. Összességében ez a különbség a GFP és az EGFP között.

Referencia:

1.Cinelli, RA, et al. "A továbbfejlesztett zöld fluoreszcens fehérje mint eszköz a fehérje dinamikájának és lokalizációjának elemzéséhez: Helyi fluoreszcencia vizsgálat egymolekulás szinten." Fotokémia és fotobiológia., Amerikai Egyesült Államok Nemzeti Orvostudományi Könyvtára, 2000. június. Itt érhető el  
2. “PDB101: A hónap molekulája: zöld fluoreszcens fehérje (GFP).” RCSB: PDB-101. Itt érhető el

Kép jóvoltából:

1. „GFP fluoreszcens fehérje film”, készítette Erin Rod - Saját munka, (CC BY-SA 4.0) a Commons Wikimedia-on keresztül 
2. „CA2 amigo2 eGFP egér” Dudek, Serena; Curuana, Douglas; Carstens, Kelly - Saját munka, (CC BY-SA 3.0) a Commons Wikimedia segítségével