Különbség az SDS oldal és a Western Blot között

Fő különbség - SDS oldal vs Western Blot
 

A Western blot egy olyan módszer, amely egy fehérjemintából kimutat egy specifikus fehérjét. Ezt a technikát több kulcsfontosságú lépésben hajtjuk végre: gélelektroforézis, blotolás és hibridizáció. Nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid-gél elektroforézis (SDS oldal) egyfajta gélelektroforézis technika, amelyet a fehérjék méretük (molekulatömeg) alapján történő elválasztására használnak. A Western blot egy blot membrán speciális lapja, amelyet arra használunk, hogy a fehérjék ugyanazt a mintázatát átadjuk az SDS oldalon. Az SDS oldal és a Western blot közötti fő különbség az Az SDS oldal lehetővé teszi a fehérjék elválasztását egy keverékben míg A Western blot lehetővé teszi egy adott fehérje kimutatását és mennyiségi meghatározását egy keverékből. Mindkettő hasznos fehérjeanalízis-vizsgálatokban.

TARTALOMJEGYZÉK
1. Áttekintés és a legfontosabb különbség
2. Mi az SDS oldal
3. Mi a Western Blot?
4. Összehasonlítás egymással - SDS oldal vs Western Blot
5. Összegzés

Mi az SDS oldal??

Az SDS Page egy gél-elektroforézis technika, amelyet a fehérjék elválasztására használnak. Általában a biokémiában, a genetikában, a kriminalisztikában és a molekuláris biológiában alkalmazzák. Miután a fehérjéket kivonták a mintából, SDS-ből és poliakrilamidból álló gélen futtatjuk. Az SDS egy anionos tisztítószer, amelyet a fehérjék (denaturáló fehérjék) linearizálására és a linearizált fehérjék molekulatömegükhöz viszonyított negatív töltésének biztosítására használnak. A poliakrilamid lesz a gél szilárd hordozója. A negatívan töltött denaturált fehérjék a gélen keresztül a készülék pozitív vége felé vándorolnak. A fehérjék mérete szerint a migráció sebessége különbözik a fehérjék között, és elválasztódik. Ezért az SDS oldal hasznos az egyes fehérjék méretük szerinti elválasztására.

A poliakrilamid gél fehérjék frakcionálására történő előkészítése kritikus lépés az SDS-ben. A poliakrilamid helyes koncentrációja és a felhasznált térhálósító szer típusa erősen befolyásolja a gél fizikai tulajdonságait, ami a különböző fehérjék tényleges elválasztását teszi lehetővé. A gél pórusméretét a hatékony elválasztás érdekében megfelelően kell kezelni. Az SDS oldalt azonban nagy felbontású protein-elválasztási technikának tekintik.

Az SDS Page technikának jelentős korlátozása van a fehérjeelemzésben. Mivel az SDS a szétválasztás előtt denaturálja a fehérjéket, nem teszi lehetővé az enzimatikus aktivitás, a fehérjekötő kölcsönhatások, a fehérje kofaktorok stb. Kimutatását..

01. ábra: SDS oldal

Mi a Western Blot??

A Western blot technika lehetővé teszi egy specifikus protein kimutatását egy fehérjekeverékből, valamint a protein mennyiségének és molekulatömegének mérését. A Western blot az a membrán, amelyet a blotolás során használnak az SDS-poliakrilamid gélben található fehérjeminták tükrös képének elnyerésére. A Western blotoláshoz használt membrán főként nitrocellulózból vagy polivinilidén-difluoridból (PVDF) áll. Az átvitt fehérjével ellátott membrán felhasználható a kívánt fehérje azonosítására. Kiváló minőségű antitestet igényel a kívánt fehérje hibridizációval történő kimutatására. Az antitest kötődik a specifikus antigénjéhez, és felfedi a kívánt antigén jelenlétét, amely egy fehérje.

A fehérjék átvitele az SDS poliakrilamid gélről a Western blotba elektroblotálással történik. Ez egy hatékony és gyors módszer, amely a fehérjék elektroforézisét eredményezi a gélből és átjut a nitrocellulóz membránra (Western blot)..

02 ábra: Western blot

Mi a különbség az SDS oldal és a Western Blot között?

SDS oldal vs Western blot
Az SDS Page gél-elektroforézis technika.	A Western blot egy technika, amelyet egy membránon hajtanak végre, hogy egy keverékből specifikus proteint detektáljanak.
Használat
Az SDS oldal lehetővé teszi a fehérjék méretük szerinti szétválasztását.	A Western blot lehetővé teszi a fehérjék átvitelét az SDS oldalgélön a minta megváltoztatása nélkül, és lehetővé teszi a specifikus antitestekkel történő hibridizációt.
hátrányok
Ennek a módszernek a hátránya a fehérje denaturáció, a magas költségek és a neurotoxin vegyületek jelenléte.	Ez a technika időigényes, és nagy tapasztalattal rendelkező személyes és sajátos ellenőrzött feltételeket igényel.

Összegzés - SDS oldal vs Western Blot

Az SDS oldal és a Western blot két módszer a protein elemzésben. Az SDS-oldal lehetővé teszi a fehérjék könnyű elválasztását a gélen a molekulatömegük alapján. A Western blot segíti a specifikus protein jelenlétének és mennyiségének igazolását specifikus antitestekkel történő hibridizáción keresztül. Ez a különbség az SDS oldal és a Western blot között.

Irodalom:
1. Blancher, C. és A. Jones. “SDS -PAGE és Western blotting technikák.” Módszerek a molekuláris orvoslásban. Az Egyesült Államok Nemzeti Orvostudományi Könyvtára, n.d. Web. 2017. március 27
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig és David H. Petering. “Natív SDS-PAGE: A fehérjék nagyfelbontású elektroforetikus szétválasztása a natív tulajdonságok megtartásával, beleértve a kötött fémionokat is.” Metallomika: integrált biometál tudomány. Az Egyesült Államok Nemzeti Orvostudományi Könyvtára, 2014. május. Web. 2017. március 27.

Kép jóvoltából:
1. „SDS-PAGE elektroforézis” Bensaccount által az angol Wikipedia-ban (CC BY 3.0) a Commons Wikimedia segítségével
2. „Western blot 114A” Amanthabagdon - Saját munka (Public Domain) a Commons Wikimedia segítségével