Különbség az SDS és a natív oldal között

Fő különbség - SDS oldal vs natív oldal
 

Az SDS és a natív oldal a molekuláris biológiában alkalmazott poliakril-amid-gél elektroforézis technikák két típusa. Az kulcs különbség az SDS oldal és a natív oldal között az alkalmazott poliakrilamid gél típusa. Az SDS Page denaturáló gélt használnak, ezért a molekulákat molekulatömegük alapján választják szét. Ezzel szemben a natív oldalon nem denaturáló géleket használnak. Ezért a molekulákat méretük, töltésük és alakjuk alapján választják el egymástól.

A poliakrilamid gélelektroforézis (oldal) olyan akril-amid-monomerek metilén-bisz-akrilamiddal történő polimerizálásával készített gélt használ. A poliakrilamid keményebb és hőállóbb, mint az agaróz. A poliakrilamid gélek kisebb pórusmérettel rendelkeznek, ami lehetővé teszi a fehérjék hatékony elválasztását. Az oldalbeállításoknak két fő típusa van, nevezetesen az SDS oldal és a natív oldal. SDS oldal vagy Nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid-gél elektroforézis elválasztja a fehérjéket molekulatömegük alapján. A denaturáló géleket az SDS oldal használja. A Native Page nem denaturáló géleket használ, és elválasztja a fehérjéket méretük, töltésük és alakjuk alapján (3D-s konformáció).

TARTALOMJEGYZÉK

1. Áttekintés és a legfontosabb különbség
2. Mi az SDS oldal
3. Mi a natív oldal?
4. hasonlóságok az SDS oldal és a natív oldal között
5. Összehasonlítás - SDS oldal és a natív oldal táblázatos formában
6. Összegzés

Mi az SDS oldal??

Az SDS oldal a leggyakoribb elektroforetikus módszer a fehérjék molekulatömegük alapján történő elválasztására. A gélt SDS (nátrium-dodecil-szulfát) hozzáadásával készítjük, amely mosószer. Az SDS a proteineket monomerekké bontja. Az SDS anionos tisztítószer. Ezért széles pH-tartományban nettó negatív töltést ad a fehérjékhez. Amikor a nettó negatív töltés a fehérjemolekulákra hárul, a töltésváltozás miatt a komplex struktúrák lebonthatók. A negatív töltés miatt a fehérjék vonzódnak a pozitív vég felé. Így az alacsony molekulatömegű molekulák gyorsabban haladnak a gél mátrixon, és az anód közelében megfigyelhetők, míg a nagyobb molekulatömegű fehérjék a kutakhoz közelebb kerülnek megfigyelésre..

01. ábra: SDS oldal

A polipeptidlánccal való SDS-kötés arányos annak relatív molekulatömegével. Ezért a molekulatömeg SDS-oldalon is meghatározható. Az SDS Page gélek festését brómfenol-kék festéssel végezzük. Az SDS oldal alkalmazási területe nagyobb, ha felhasználható a relatív molekulatömeg becslésére és a fehérjék relatív mennyiségének meghatározására egy fehérjekeverékben. Az SDS-oldal felhasználható a fehérjeeloszlás meghatározására egy fehérjekeverékben is. Az SDS oldalt a fehérjék tisztítására és értékelésére is alkalmazzák. Előzetes eljárásként alkalmazzák a Western blot és a hibridizáció során, amelyet viszont a fehérje feltérképezéséhez és azonosításához használnak.

Mi a natív oldal??

A natív poliakrilamid gél elektroforézise (natív oldal) nem denaturáló gélt használ. Ezért SDS-t vagy más denaturálószert nem adunk a gélmátrixhoz. A Natív Oldalban a fehérjék szétválasztása a töltés és a fehérje mérete alapján történik. Ezért a fehérje mobilitása a töltéstől és a fehérje méretétől függ.

A fehérje töltése az aminosavak oldalláncától függ. Ha az oldalláncok negatív töltésűek, a fehérje összességében negatív töltést fog kapni, és fordítva. A fehérjék 3D-s konformációt tartanak fenn a hajtogatás miatt. A behajtás a fehérjékben lévõ különféle kötéstípusok, például diszulfidkötések, hidrofób kölcsönhatások és hidrogénkötések eredményeként jön létre. Ezért, ha a natív oldalt semleges pH-n hordozzuk, a fehérjéket a fehérje molekuláris alakja szerint választjuk el. Ezért a natív oldal érzékeny módszerként használható a fehérje töltésének vagy konformációjának megváltozására.

A natív oldal fő előnye, hogy az oldalanalízishez felhasznált fehérje az eredeti elemzés után eredeti állapotában kinyerhető, mivel a protein nem zavarja a folyamat során. A natív oldal egy viszonylag nagy teljesítményű technika, és a protein stabilitása megnövekszik.

02 ábra: Natív oldal

A gél futtatásának befejezése után a Native Page gélt brómfenol-kékkel vagy bármilyen más megfelelő festési reagenssel megfestve lehet megtekinteni. A natív oldal alkalmazása magában foglalja a savas fehérjék elválasztását, ideértve a glikoproteineket, például a humán rekombináns eritropoetint, vagy a szarvasmarha-szérumalbuminban (BSA) lévő fehérjék azonosítását..

Milyen hasonlóságok vannak az SDS oldal és a natív oldal között?

• Az SDS és a Native Page rendszerekben egyaránt poliakrilamid gélt használnak a gél mátrixaként.
• Mindkettőt a fehérjék elválasztására és azonosítására használják.
• Mindkettő elektroforetikus mobilitást alkalmaz a vegyületek elválasztására.
• Mindkettőt függőlegesen vagy vízszintesen is el lehet végezni (leginkább függőleges oldalbeállításként, mert a futási hossz nagyobb).
• Az elektroforézis készülék, beleértve a géltartályt, a fésűket, a tápegység mindkét technika működéséhez szükséges.
• A gél megjelenítéséhez festési eljárások alkalmazhatók mindkét módszernél.

Mi a különbség az SDS és a natív oldal között?

SDS oldal vs natív oldal
Az SDS oldal vagy a nátrium-dodecil-szulfát oldal elválasztja a fehérjéket molekulatömegük alapján, és denaturáló gélt használ.	A Native Page nem denaturáló géleket használ, és elválasztja a fehérjéket méretük, töltésük és alakjuk alapján (3D-s konformáció).
Gél típusa
Denaturáló gélt használnak az SDS-oldalon.	A natív oldalon nem denaturáló gélt használnak.
Az SDS jelenléte
Az SDS tisztítószerként van jelen, hogy negatív töltést adjon a mintára az SDS oldalon.	Az SDS nincs jelen a natív oldalon.
Elkülönítési alap
A fehérjék szétválasztása a fehérje molekulatömegétől függ az SDS oldalon.	Az elválasztás a natív oldalon levő fehérje molekula méretétől és alakjától függ.
A fehérje stabilitása
Az SDS oldalon a fehérje stabilitása alacsony.	A fehérje stabilitása magas a natív oldalon.
Az eredeti fehérje visszanyerése
Nem lehetséges, mert denaturált az SDS oldalon.	Lehetséges a natív oldalon.

összefoglalás - SDS oldal vs natív oldal

Az SDS oldal és a natív oldal a poliakrilamid gélelektroforézis technikák két típusa, amelyeket a fehérjék elválasztására használnak. Az SDS oldalt egy SDS nevű mosószerrel kezelik. Az SDS általános negatív töltést ad a fehérjének, amely ezután a protein denaturálódását eredményezi. Ezért a fehérjéket molekulatömegük alapján választják szét. Ezzel szemben a Native Page technika nem használ denaturálószert. Így a fehérjéket vagy méretük, vagy alakjuk szerint választják el egymástól. Ez a különbség az SDS oldal és a natív oldal között.

Referencia:

1. „A poliakrilamid gél elektroforézisének alapelve és módszere (SDS-PAGE).” A poliakrilamid gél elektroforézisének alapelve és módszere (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -ASIA-. Itt érhető el
2. „Natív gélek”. Szövetség Protein Laboratories | Biofizikai jellemzési szolgáltatások. Itt érhető el  

Kép jóvoltából:

1.'SDS-PAGE Elektroforézis'By Bensaccount az angol Wikipedia-ban (CC BY 3.0) a Commons Wikimedia-on keresztül  
2.Töltsön be egy mintát egy poliakrilamid gél elektroforézis kútba. Blaz Nemec, Ljubljana, Szlovénia (CC BY-SA 2.0), a Commons Wikimedia segítségével