Az RT-PCR és a QPCR közötti különbség

Fordított transzkripciós polimeráz láncreakció (RT-PCR)

RT-PCR vs. QPCR

A biotechnológia terén elért haladás számos módszert fedezett fel a szervátültetés iránti igények kielégítésére az évek során. Korábban az a személy, aki közvetlenül a halál után bármilyen szervet önként adományozna a rászoruló betegnek, csak átültetéssel kezdheti meg a műtétet. A biológusok folyamatos kutatása és kutatása az őssejtek felfedezéséhez vezet.

Az őssejtekre vonatkoznak azok, amelyeket egy embrió DNS-ből vesznek, és amelyek olyan sejtek regenerálódásának forrásává válnak, amelyek alapvetően azon szerv klónját alkotják, amelyből a DNS-t kinyerték. Míg az emberi jogi aktivisták az ilyen eljárások leállítását lobbizják, a sikeres műveletek valóban bebizonyították az őssejtek fejlődésének hatékonyságát a szervátültetésekben.

Az őssejtek értékelése és teljes megértése előtt azonban meg kell ismerkedni a tudományos felfedezéshez kapcsolódó különböző terminológiákkal. Az őssejt-tenyésztés a DNS-sel és annak kódolásával foglalkozik. Ezért elengedhetetlen, hogy a hallgatók vagy a terület iránt érdeklődő egyének megkülönböztessék az RT-PCR és a qPCR.

A reverz transzkripciós polimeráz láncreakció (RT-PCR) a polimeráz láncreakció (PCR) sok változatának egyike. Ezt a laboratóriumi technikát széles körben használják a molekuláris biológiában annak érdekében, hogy a tudósok egy adott DNS-szekvencia több példányát készítsék egy "amplifikációnak" nevezett eljárás útján. Az RT-PCR és a hagyományos PCR közötti különbség az, hogy az RNS-t először fordított módon átírják annak DNS-komplementerébe, amely a fordított transzkriptázt használja fel. A fordított transzkripciót tartalmazó új komplementer DNS-t ezután a hagyományos PCR vagy valós idejű PCR alkalmazásával amplifikáljuk.

A legtöbb ezt a folyamatot tanulmányozó hallgató gyakran hibát követ el a reverz transzkripciós PCR és a valós idejű PCR cseréjében, mivel a kettőt hasonló módon rövidítik. A zavar elkerülése érdekében a biológusok a valós idejű PCR-t kvantitatív valós idejű PCR-ként vagy qPCR-ként jelölik meg.

A QPCR nagyban különbözik az RT-PCR-től, mivel a qPCR felelős az amplifikáció méréséért. Elmondható, hogy az RT-PCR elindítja az amplifikációs folyamatot, míg a qPCR az eljárás bekövetkeztével méri.

Kvantitatív valós idejű PCR

A QPCR valóban forradalmasította a hagyományos, egyirányú megközelítési módszert, amikor a DNS és az RNS mennyiségi meghatározására került sor, mivel a qPCR módszer alkalmazása lehetővé teszi a biológusok számára, hogy a nukleinsav kezdeti koncentrációját meghatározzák még a reakció eredményeinek megfigyelése előtt, és lefirkantotta.

A qPCR alkalmazása, amelyet manapság a genetikai vizsgálatok legerősebb és legérzékenyebb elemzési módszerének tekintnek, jelentősen kibővült. Jelenleg részt vesz a kvantitatív génexpressziós elemzésben, a genotipizálásban, a kórokozó kimutatásában és az SNP elemzésében, valamint az RNS-interferencia mérésekkel.

A QPCR-et gyakran kombinálják a reverz transzkripcióval, hogy meghatározzák a megfigyelt és kísérletezett szövetek sejtjeiben található hírvivő RNS-t és MicroRNS-t. Ez ezután újabb látható különbséget eredményez a kettő között: Az RT-PCR felhasználható az amplifikációs folyamatban, de a kvantitatív meghatározáshoz ezt a qPCR-rel kell egyesíteni..

A QPCR arról is ismert, hogy kvantitatívabb, mivel az adatok gyűjthetők a PCR exponenciális növekedési (log) fázisának előrehaladtával. A biológusok megjegyzik, hogy a PCR melléktermékének mennyisége közvetlenül arányos a templát nukleinsav mennyiségével, amelyet a qPCR-en mérnek..

Másrészről, az RT-PCR messze nem kvantitatív jellegű, mivel az amplifikált sáv intenzitásának gélön történő megfigyelése a koncentráció meghatározott szabványát követve „félkvantitatív” következtetésekhez vezethet.

Összefoglaló:

Az 1.QPCR és az RT-PCR mind a biotechnológiában használt fogalmak, mind a DNS több példányának előállítására használják.
2.RT-PCR-t alkalmaznak a DNS-kód fordított transzkripciójának amplifikálására; A QPCR méri az erősítést.
A 3.RT-PCR az amplifikációt, míg a qPCR a mennyiségi meghatározást jelenti.
4.QQCR kvantitatív jellegű, míg az RT-PCR nem.