Különbség a nitrocellulóz és a PVDF között

Fő különbség - Nitrocellulóz vs PVDF
 

A Western blot módszer olyan módszer, amely lehetővé teszi a specifikus fehérjék kimutatását és mennyiségi meghatározását egy fehérjemintából. A módszer megbízhatósága attól függ, hogy megfelelő membránt választunk-e a fehérjéknek a gélből történő felszívódására. Különböző típusú mikroporózus membránok léteznek. A nitrocellulóz és a PVDF membránok két ilyen membrán, amelyeket a kutatók előnyben részesítenek, mivel speciális tulajdonságokkal rendelkeznek a többi típusú membránokhoz képest. A nitrocellulóz vagy a PVDF közötti választás szintén egy másik kihívás a Western blotban. Mind a nitrocellulóz, mind a PVDF magas fehérjeelnyelési képességgel rendelkezik. A legfontosabb különbség a nitrocellulóz és a PVDF membrán között az A nitrocellulóz membránok nem képesek az antitestek sztrippelésére, és a membrán újbóli felhasználása az ellenanyag újraszaporodásához, míg a PVDF membránok képesek sztrippelni és újra felhasználni.

TARTALOMJEGYZÉK
1. Áttekintés és a legfontosabb különbség
2. Mi a nitrocellulóz?
3. Mi a PVDF?
4. Összehasonlítás - Nitrocellulóz és PVDF
5. Összegzés

Mi az a nitrocellulóz??

A nitrocellulóz egy polimer, amelyet cellulóz salétromsavval történő kezelésével állítanak elő, és a mikroporózus membránok előállításához használják a molekuláris biológiában, különösen olyan blotolási technikákhoz, mint például a déli, északi és nyugati blotolás. A nitrocellulóz membránok pórusmérete 3 és 20 μm között lehet. A nitrocellulóz mikroporózus membránjai megkönnyítik a membrán felületén zajló immunkémiai reakció kimutatását. Ezért a nitrocellulóz membránokat gyakran használják a fehérjék immobilizálására és a specifikus fehérjék kimutatására Western blotban. A nitrocellulóz membránok immobilizálhatják a glikoproteineket és a nukleinsavakat is.

Több tulajdonság miatt a nitrocellulóz membránok előnyösek az oldalsó áramlási vizsgálatokban. A nitrocellulóz membránok nagy koncentrációban szívják fel a fehérjéket. A membrán nedvesítésére használt oldószer nem csökkenti a nitrocellulóz membránfehérje felszívódását. A nitrocellulóz membránok könnyen vághatók a kívánt gélméretre, és a fehérjéket elektromos vagy kapilláris transzfer útján vihetik át a gélből a membránba. A nitrocellulóz lehetővé teszi a fehérjék gyorsabb áramlását a membránon keresztül, nagy kötőképességgel. A nitrocellulóz javítja a kezelhetőséget. A nitrocellulóz membrán másik speciális tulajdonsága, hogy oldhatatlan, vízálló ragasztókkal könnyen ragasztható különféle műanyag hátterekre..

01. ábra: Nitrocellulóz membrán Western blot vizsgálatához

Mi az a PVDF??

A polivinilidén-difluorid (PVDF) a vinilidén-difluorid polimerizációjával előállított fluorpolimer, amelynek nagy a fehérjék immobilizáló képessége. Ezért a PVDF-ből készített mikroporózus membránokat Western blot eljárásban használják specifikus fehérjék elemzésére a fehérjekeverékekből. A PVDF membránok szintén felhasználhatók aminosavak elemzésére és fehérje szekvenálására. A PVDF membrán legfontosabb jellemzője a nitrocellulóz membrán fölött az, hogy könnyen le lehet vonni az ellenanyagoktól és felhasználható a későbbi antitest próbákhoz.

A PVDF membránok vastagabbak, mint a nitrocellulóz membránok; ennélfogva ellenállóbb az újrafelhasználás során fellépő károsodásokkal szemben. A PVDF membránok nagyon hidrofóbak. Ezért használat előtt áztassák őket metanolban vagy izopropanolban.

Mi a különbség a nitrocellulóz és a PVDF között??

Nitrocellulóz vs PVDF
A nitrocellulóz cellulózból álló polimer.	A PVDF egy fluorpolimer, amelyet vinilidén-difluorid polimerizációjával állítanak elő.
Membrán pórusméret
A pórusméret általában 0,1, 0,2 vagy 0,45 μ	A pórusméret általában 0,1, 0,2 vagy 0,45 μm
Fehérjekötő képesség
A nitrocellulóz fehérjekötő képessége 80-100 μg / cm2.	A PVDF fehérjekötő képessége 170-200 μg / cm2.
Érzékenység
Ennek alacsony érzékenysége van a PVDF-hez képest.	Ennek magas érzékenysége van.
Alacsonyan expresszált fehérjék kimutatása
Mivel az érzékenység alacsony a nitrocellulóz membránokban, ez nem alkalmas alacsonyan expresszált fehérjék kimutatására.	Ez nagy érzékenységének köszönhetően jobban alkalmazható alacsonyan expresszált fehérjék kimutatására.
Háttérzaj
Ennek alacsonyabb a háttérzaj	Ennek magasabb háttérzaj van.
Kölcsönhatások a fehérjékkel
A fehérjemolekulák hidrofób kölcsönhatások révén kötődnek a nitrocellulóz membránokhoz.	A fehérjék hidrofób és dipol kölcsönhatások révén kötődnek a PVDF membránokhoz.
A membrán jellege
A nitrocellulóz törékeny és törékeny. A nitrocellulóz változatai azonban elérhetők és ellenállóak.	A PVDF tartósabb és nagyobb kémiai ellenállással rendelkezik.
Képesség sztrippelni és újra felhasználni
A nitrocellulóznak nehéz lehet a sztrippelés és a reprodukció a jel elvesztése nélkül.	A PVDF ideális az alkalmazások lemásolásához és szekvenálásához.
Alkalmasság
A nitrocellulóz ideális kis molekulatömegű fehérjék kimutatására.	A PVDF alkalmasabb a nagyobb molekulatömegű fehérjék kimutatására.
Egyéb felhasználások
A nitrocellulóz felhasználható nukleinsav-elemzésre és dot / slot blot-ra.	A PVDF felhasználható fehérje szekvenáláshoz és szilárd fázisú vizsgálati rendszerekhez.
Költség
Ez olcsóbb, mint a PVDF membránok.	Ez drágább, mint a nitrocellulóz membrán.
Előnedvesítés szükségessége
A nitrocellulóz membránok nem igényelnek metanollal történő előkezelést	A PVDF membránok metanollal történő előkezelést igényelnek.

Összegzés - Nitrocellulóz vs PVDF

A nitrocellulóz membránok voltak az első olyan membránok, amelyeket kereskedelemben használtak oldalirányú áramlási vizsgálathoz. Nagyon képesek felszívni a fehérjéket. Ezért a nitrocellulóz membránokat használják a Western blotban. A PVDF egy másik típusú membrán, amelyet Western blotban használnak, és szintén magas fehérjeelnyelési képességgel rendelkezik. Mindkét típust használják a Western blotban a fehérje analízishez. A PVDF membránok azonban speciálisabb tulajdonságokkal rendelkeznek, így alkalmasabbak a Western-blot vizsgálathoz, mint a nitrocellulóz-membránok. De a nitrocellulóz membránok alkalmasabbak az alacsony molekulatömegű fehérjék kimutatására, a PVDF membránok pedig alkalmasabbak a nagy molekulatömegű fehérjék kimutatására. Ez a különbség a nitrocellulóz és a PVDF membránok között.

Kép jóvoltából:
1. „Western blot transzfer” Bensaccount által az angol Wikipedia-ban (CC BY 3.0) a Commons Wikimedia segítségével

Referencia:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun és Thomas A. Neubert. "Nitrocellulóz membránok használata fehérje karakterizáláshoz mátrix-asszisztens lézeres deszorpcióval / ionizációs tömegspektrometriával." Analitikai kémia. Az Egyesült Államok Nemzeti Orvostudományi Könyvtára, 2006. július 15. Web. 2017. március 28
2. „Molekuláris markerek és növényi biotechnológia”. Google Könyvek. N.p., n.d. Web. 2017. március 28
3.Hétfő, 2013. április 8. Tweet. "A varázslók a membránban: bölcsen válasszák a Best Western blot eredményeit." Biocompare. N.p., 2013. április 8. Web. 2017. március 28