Különbség a PCR és a valós idejű PCR között

PCR vs. valós idejű PCR

A PCR vagy a polimeráz láncreakció forradalmasított felfedezés a modern molekuláris biológiában, amelyet először Kary Mullis kémikus fejlesztett ki 1983-ban. A PCR alapvető gondolata az, hogy két olyan DNS-szekvencia ellentétes szálával komplementer primerek, amelyek egymással szemben vannak; a primerek komplementer szálakat állítanak elő, amelyek mindegyike tartalmazza a másik primert. Ennélfogva az eredmény nagy mennyiségű szekvencia, amely megfelel a DNS-nek, amely a két láncindító között fekszik. A DNS polimeráz enzimet a primerek meghosszabbítására használják a PCR-ben. A DNS-polimeráz hőstabil enzim, és képes megmaradni magas hőmérsékleten (94–95 ° C), amelyet templát DNS denaturálására használnak..

A PCR három lépést foglal magában, nevezetesen a denaturáció ismételt körét, a primerek lágyítását és a DNS szintézisét. A reakció végrehajtására hőkezelő gépet használnak, hogy beprogramozható legyen a hőmérséklet gyors és pontos megváltoztatására. A PCR alkalmazásai a bűnügyi nyomozás, a DNS ujjlenyomata, a kórokozók kimutatása és a korai emberi fajok DNS-ének elemzése.

Mi a hagyományos PCR??

A hagyományos PCR három fő stádiuma van, nevezetesen: DNS amplifikációs szakasz, a PCR elválasztása és a termékek kimutatása. A DNS-szegmensek elválasztását tipikusan agarózgél-elektroforézissel végezzük. A termékeket etil-imim-bromiddal megfestjük. Végül a detektálást úgy érik el, hogy a sávokat UV-fény alatt gélekre vizualizálják. Ezért a hagyományos PCR végeredményeit nem számokkal fejezzük ki. Általában a hagyományos PCR csak egy paramétert képes detektálni.

Mi a valós idejű PCR??

A valós idejű PCR kimutatja a termékek amplifikációját, mivel a termékeket szintetizálják. A technológia fejlődésével a PCR nagyon népszerű technikává vált, különösen az élelmiszerekben található baktériumok kimutatására és azonosítására. A valós idejű PCR fluoreszkáló festékrendszerrel és fluoreszcens detektáló képességgel felszerelt termociklerrel működik.

Mi a különbség a hagyományos PCR és a valósidejű PCR között??

• A hagyományos PCR időigényesebb, mivel gél elektroforézist alkalmaz az amplifikált PCR termékek elemzésére. Ezzel szemben a valós idejű PCR kevesebb időt vesz igénybe, mivel képes észlelni az amplifikációt a reakció korai szakaszában.

• A valós idejű PCR adatokat gyűjt a PCR exponenciális növekedési szakaszában, míg a hagyományos PCR a reakció végpontján gyűjt adatokat..

• A hagyományos PCR végeredményének eredményei nem feltétlenül pontosak, de a valós idejű PCR eredményei nagyon pontosak.

• A valós idejű PCR érzékenyebb, mint a hagyományos PCR.

• A hagyományos PCR felbontása nagyon gyenge, míg a valós idejű PCR nagyon kevés változást képes felismerni a magas felbontás miatt.

• A hagyományos PCR végpont-detektálása rövid dinamikus tartományú, míg a valós idejű PCR-detektálás széles dinamikus tartományú.

• A hagyományos PCR-rel ellentétben az automatizált detektálási technikák megtalálhatók a valós idejű PCR-ben.

• A hagyományos PCR rendkívül kifinomult és munkaigényes, mint a valós idejű PCR.

• A valós idejű PCR-rel ellentétben a hagyományos PCR nem képes megkülönböztetni az elhalt és élő baktériumokat.

• A valós idejű PCR fluoreszkáló festékrendszert használ a termékek kimutatására, míg a hagyományos PCR etidium-bromidot és UV-fényt használ az agaróz gél közegének megjelenítésére..